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资阳pcr检测来电咨询「英瀚斯」心事谁人知歌词

   日期:2024-03-14     作者:英瀚斯    浏览:56    评论:0    
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2分钟前 资阳pcr检测来电咨询「英瀚斯」[英瀚斯2eefa30]内容:

甲l基化特异性的PCR

Herman 等( 1996 )在使用重亚硫酸盐处理的基础上新建的一种方法。该方法敏感性高,主要用于作定性研究。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧定被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧定不变;随后设计针对jia基化和非jia基化序列的引物进行PCR。而安捷伦和Illumina的探针能够在低密度下捕获更多数量的变异。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后jia基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在jia基化;反之,说明被检测的位点不存在jia基化。

特点:适用范围广,能够检测特异位点是否发生jia基化。

亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)

亚硫酸氢盐修饰后测序法( BSP ) Frommer 等( 1992 )提出的研究 DNA jia基化方法,此方法可靠性及jing确度高,能明确目的片段中每一个 CpG 位点的jia基化状态。用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生jia基化的胞嘧ding被转化为尿嘧ding,而jia基化的胞嘧ding不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定,zui后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生jia基化,称为BSP-直接测序法。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧定全部转化为胸腺嘧定,zui后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生jia基化,称为BSP-直接测序法。将PCR产物克long至载体后进行测序,可以提高测序成功率,这种方法称为BSP-ke隆测序法。

特点:jing确度高,能够准确检测出jia基化的程度百分比。

RIP

技术概述

RIP是研究体内蛋白与RNA互作的重要技术。这些方法究竟孰优孰劣,斯坦福大学医学院遗传学系的研究人员对市场上三个主流的外显子组测序平台进行了比较。该技术先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-RNA”互作复合物,裂解细胞后,用靶蛋白特异的抗l体(或标签抗l体)做免l疫沉淀,获得“靶蛋白-RNA”互作复合物,去交联分离其中的RNA;针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物,

做qPCR实验,验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合,或者将分离出来的RNA做高通量测序,筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。

技术流程

细胞交联-→细胞裂解-→免l疫共沉淀→去交联→RNA分离→建库→高通量测序(或qPCR)。

RNA提取处理的步骤如下:

在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使其终浓度为0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二焦碳酸酯为活性很强的物,须在通风橱中小心使用)

将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通风柜中37℃ 或室温下处理过夜。

将DEPC-H2O小心倒入废液瓶中,将装有DEPC- H2O 处理过的塑料制品的容器以铝箔封口,高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。

灭菌塑料制品烘烤干燥,置洁净处备用。

玻璃和金属物品250 ℃烘烤3小时以上。

原文链接:http://www.i816.net/news/show-28091.html,转载和复制请保留此链接。
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